99久久久精品免费观看国产,日产精品卡三卡在线,亚洲av无码码潮喷在线观看,国产精品18久久久久久麻辣

當(dāng)前:首頁 > 新聞動態(tài) > 正文

實時熒光定量PCR 技術(shù)的主要應(yīng)用有哪些?

依鉦生物 / 2018-02-09

所謂Real-Time PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應(yīng)中每一個循環(huán)擴增產(chǎn)物量的變化,通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對起始模板進行定量分析。real-time PCR技術(shù)即實時熒光定量PCR避免了傳統(tǒng)PCR以終產(chǎn)物監(jiān)測定量產(chǎn)生的偏差,提高實驗的重復(fù)性。該技術(shù)已經(jīng)被廣泛用于監(jiān)測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果。


實時熒光定量PCR 技術(shù)的主要應(yīng)用

1. DNA 或RNA 的絕對定量分析:包括病原微生物或病毒含量的檢測,轉(zhuǎn)基因動植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測,RNAi 基因失活率的檢測等;

2. 基因表達差異分析:例如比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等 ),特定基因在不同時相的表達差異以及CDNA 芯片或差顯結(jié)果的確證;

3. 基因分型:例如SNP 檢測,甲基化檢測等。


Realtime PCR 常用的兩種方法分別為Sybr green(熒光染料摻入法)和Taqman probe (探針法)。


SYBR green
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。

此方法適用于:

1、靈敏度高:使用SYBR可使熒光效果增強到1000倍以上

2、通用性好,不需要設(shè)計探針,方法簡便,省時,價格低廉。

3、通用型方法,在國內(nèi)外科研中普遍使用。

4、高通量大規(guī)模的定量PCR檢測

5、專一性要求不高的定量PCR檢測。


Taqman Probe
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步

此方法適用于:

1、具有高適應(yīng)性和可靠性,實驗結(jié)果穩(wěn)定重復(fù)性好,特異性更高。

2、適用于擴增序列專一的體系的檢測。

3、樣品中靶基因含量過低的定量PCR檢測。

4、靶基因的特異序列較短,無論怎樣優(yōu)化引物設(shè)計條件都不能解決。

5、存在與靶基因同源的序列,在PCR中容易出現(xiàn)非特異性擴增,對特異性要求較高的定量。

6、廣泛用于人類傳染病的診斷和病原定量,在動物病原體基因的檢測,畜禽產(chǎn)品的檢驗檢疫,生物制品的鑒定。

免费黄色电影在线观看| AV永久天堂一区二区三区香港| 国精产品一区一区三区有限在线| 国产成人综合久久精品推最新| 少妇饥渴放荡的高潮喷水| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产精品视频一区二区三区不卡| 国偷自产一区二区三区在线视频| 国产免费爽爽视频| 蜜桃AV亚洲精品一区二区| 久久无码专区国产精品| 大地资源网最新在线播放| 久久亚洲男人第一AV网站| 国产稚嫩高中生呻吟激情在线视频| 国内精品视频一区二区八戒| 国产尤物精品视频| 99精品久久精品一区二区| 人妻丰满熟妇岳av无码区hd| 欧美日韩精品一区二区三区不卡| 亚洲国产精品久久人人爱| 亚洲AV乱码一区二区三区按摩| 国产毛片毛多水多的特级毛片| 亚洲精品美女久久久久99| 无码国模国产在线观看| 日本牲交大片免费观看| 久久久久亚洲国产av麻豆| 成人激情五月天| 国产在线拍揄自揄拍无码| 国产精品欧美成人| 最新国产毛2卡3卡4卡| 国产一区二区在线影院| 中文字幕丰满乱子无码视频| 亚洲日韩精品一区二区三区无码| 色伦专区97中文字幕| 亚洲国产成人无码精品| 国产午夜无码视频在线观看| 久久永久免费人妻精品下载| 久久经精品久久精品免费观看| 国产69精品久久久久999小说| 最新无码国产在线视频人与| 午夜精品一区二区三区在线观看|